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高频彩官网【科技前沿】高璞组揭示病原菌介导

时间:2020-06-06 19:21 来源:未知 作者:admin

  卵白质泛素装扮束是真核细胞最紧张的翻译后装束之一。经典的泛素装扮束需求通过E1-E2-E3三酶级联反响来催化达成,而近期判定的两类L. pneumophila效应卵白(SidE和MavC)却能够通过不依赖E1-E2-E3的全新方法催化宿主卵白的泛素装扮束(图1)。高璞课题组曾于2018年正在《Cell》杂志报道了SidE家族卵白催化反响的构造和分子机制,而此项最新事情则闭键是环绕MavC家族卵白睁开研讨。

  MavC所正在基因组簇可编码三种效应卵白:Lpg2147(MavC),Lpg2148(MavC paralog A或MvcA)和Lpg2149。MavC和MvcA均能够催化泛素分子的脱氨反响(Ub-Q40转化为Ub-E40),而Lpg2149则能够抑止这两种脱氨酶的活性。近期的研讨注解,MavC还能够特异性泛素装扮束宿主卵白UBE2N,进而抑止UBE2N的平常E2成效,从而抑止NF-κB通途的活化。意思的是,假使MvcA与MavC很是好似,但MvcA却不行催化UBE2N泛素化。高频彩官网

  研讨职员操纵MavC催化制备了泛素装扮束的UBE2N(UBE2N~Ub),并解析了MavC与UBE2N~Ub复合物的晶体构造(图2a)。该构造直接揭示了MavC与UBE2N以及Ub的互作界面,并注解MavC操纵统一个活性核心催化脱氨反响及泛素化反响。MvcA与MavC的序列和构造对照注解,MvcA的Insertion构造域中并不落后|后进存正在可能与UBE2N维系的环节氨基酸,这也疏解了为何MvcA不行不变维系逛离状况的UBE2N,以及为何不行催化UBE2N的泛素装扮束。这些基于构造所得的结论,也进一步通过生化和细胞尝试得到了验证。

  出乎预料的是,MavC和MvcA还具备去泛素化酶的活性,能够特异性去除MavC介导的UBE2N泛素装扮束(图2b)。因为MvcA比MavC的去泛素化活性更强,高频彩官网所以正在实践劝化中MavC和MvcA很可以分散阐扬泛素化酶和去泛素化酶的成效。这一展现注解MavC能够操纵统一个活性口袋来催化脱氨、泛素化以及去泛素化三种酶学反响,同时判定了MavC是目前为止第一个可能同时增添和去除统一类泛素装扮束的酶。

  研讨职员进一步解析了MavC+Lpg2149复合物和MvcA+Lpg2149复合物的晶体构造(图2a)。与逛离状况下的晶体构造吐露慎密二聚体区别,Lpg2149以单体阵势与MavC或MvcA彼此功用。因为Lpg2149和Ub攻陷相通的维系名望,解说Lpg2149能够直接滋扰Ub与MavC/MvcA的彼此功用。成效尝试注解,Lpg2149确实能够同时抑止脱氨、泛素化及去泛素化。蓄志思的是,逛离状况的MavC自身就具备Lpg2149的维系构象,而MvcA则需求爆发较大的构象蜕变来杀青与Lpg2149的维系。进一步的维系尝试注解,MavC-Lpg2149的亲和力比MvcA-Lpg2149强约50倍,这与构造判辨是一律的。

  综上,本研讨较为无缺的阐明晰Mavc介导的新型泛素装扮束的催化和调控机制,既有助于分析病原与宿主彼此博弈的众样性机制,也可为新型抗细菌疗法的策画供给思绪。

  高璞研讨员为通信作家,其课题组副研讨员王勇和博士生展琪为联合第一作家。高光侠研讨员及其课题组副研讨员王新途指点并展开了细胞尝试。上海光源为晶体数据征采供给了助助。生物物理所平台杨福全研讨员和王继峰博士为质谱判辨供给了助助,陈媛媛博士为ITC尝试供给了助助。此研讨获得邦度自然科学基金委、科技部及中科院的经费助助。

  图2:a, MavC+UBE2N~Ub、MavC+Lpg2149和MvcA+Lpg2149三种复合物的晶体构造;b, MavC(上)和MvcA(下)催化UBE2N~Ub去泛素化的切割位点。

  原题目:《【科技前沿】高璞组揭示病原菌介导的新型泛素化及去泛素化的催化调控机制》